黃曲霉毒素前處理方法如上圖所示，但目前的前處理方法普遍存在操作步驟繁瑣，樣品損失嚴(yán)重，耗時(shí)長(zhǎng)，且需要消耗大量的有機(jī)溶劑，回收率不高等問(wèn)題。

在上一版的標(biāo)準(zhǔn)中采用免疫親和柱凈化法，基于免疫親和的原理來(lái)實(shí)現(xiàn)凈化除雜，雖然能夠?qū)崿F(xiàn)較好的凈化效果，但是該方法的成本較高，難以被實(shí)驗(yàn)室普及使用。因此亟需建立一種快速、準(zhǔn)確、方便的黃曲霉毒素前處理凈化方法，有利于監(jiān)控食品、調(diào)味品、飼料和茶葉中黃曲霉毒素的含量，從而保障食品安全。

標(biāo)準(zhǔn)頒布

為了滿足當(dāng)前國(guó)內(nèi)糧油檢測(cè)、監(jiān)測(cè)定量分析的要求，2020年7月，國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局發(fā)布的《LS/T 6138-2020 糧油檢驗(yàn)糧食中黃曲霉毒素的測(cè)定免疫磁珠凈化超高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)開(kāi)始正式實(shí)施。該標(biāo)準(zhǔn)擬利用免疫磁珠的凈化，基于液相色譜檢測(cè)，建立一種高通量、快速、重復(fù)性好、易于自動(dòng)化的黃曲霉毒素精準(zhǔn)定量分析方法。

標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明中指出：使用免疫磁珠法進(jìn)行樣本處理既能保留免疫親和柱良好的凈化效果和穩(wěn)定性，又能夠減低操作難度，減少操作時(shí)間和勞動(dòng)強(qiáng)度，易于自動(dòng)化處理。

標(biāo)準(zhǔn)看點(diǎn)之磁珠新用

標(biāo)準(zhǔn)看點(diǎn)1：檢測(cè)項(xiàng)目、原理及檢出限

標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥、玉米、稻谷和植物油等糧油樣品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的測(cè)定。各類物質(zhì)檢出限如下表。

標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了免疫磁珠凈化超高效液相色譜測(cè)定糧食中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、測(cè)定、結(jié)果計(jì)算和精密度等內(nèi)容。

黃曲霉毒素檢出限一覽表

檢測(cè)原理

2. 新舊標(biāo)準(zhǔn)樣品前處理方法對(duì)比

免疫親和柱凈化法樣本處理流程圖

免疫磁珠凈化法樣本處理流程圖

從兩張流程圖對(duì)比可發(fā)現(xiàn)：

采用免疫親和柱凈化法對(duì)于樣本處理需要精提后進(jìn)行凈化，操作步驟繁瑣，樣品損失嚴(yán)重，耗時(shí)長(zhǎng)，且需要消耗大量的有機(jī)溶劑，污染大；而采用免疫磁珠凈化法樣本處理只需粗提，且步驟簡(jiǎn)單易操作，耗時(shí)也較短；這一新標(biāo)準(zhǔn)的頒布，無(wú)疑是對(duì)食品安全檢驗(yàn)更有效率的保障。

3. 標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)免疫磁珠的性能要求

免疫磁珠與樣品稀釋液的反應(yīng)時(shí)間是磁珠凈化的關(guān)鍵，將免疫磁珠與濃度為5μg/kg黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)，分別考察不同反應(yīng)時(shí)間（1、3、5、10、15分鐘）結(jié)合效率，可以看出，反應(yīng)5分鐘后磁珠吸附毒素信號(hào)基本不變，說(shuō)明5分鐘的反應(yīng)時(shí)間可以滿足免疫磁珠反應(yīng)的要求。

不同反應(yīng)時(shí)間下免疫磁珠富集的AFB1含量

拓展看點(diǎn)

免疫磁珠結(jié)構(gòu)示意圖

磁珠提取法通過(guò)調(diào)節(jié)緩沖液pH值，利用靜電吸附作用與磁珠實(shí)現(xiàn)有效結(jié)合，之后在外加電場(chǎng)的條件下，去除廢液并加以洗滌，最終實(shí)現(xiàn)樣本提取處理目的。

磁珠的方法避免了抽真空和高速離心等步驟，可以減少外力對(duì)樣品的損傷。該方法操作便捷，試劑簡(jiǎn)單，而且適用于在96孔板或384孔板中的高通量自動(dòng)化操作。

隨著技術(shù)的進(jìn)步，越來(lái)越多的廠家開(kāi)發(fā)了不同的基于免疫磁珠提取試劑盒。磁珠表面多種多樣的化學(xué)修飾為實(shí)現(xiàn)復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)帶來(lái)了可能。

磁珠提取法（圖片來(lái)自網(wǎng)絡(luò)）

背景小姿勢(shì)

黃曲霉毒素（Aflatoxins，AF）是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的二氫呋喃香豆素的衍生化合物。在自然界中存在廣泛，種類較多，主要常見(jiàn)的包括黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素B₂、黃曲霉毒素G₁和黃曲霉毒素G₂. 該物質(zhì)對(duì)人畜有強(qiáng)烈的致病性、致癌性，嚴(yán)重危害人體健康，其中黃曲霉毒素B₁被世界衛(wèi)生組織（WTO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）劃定為I類致癌物，其毒性是氰化鉀的10倍。

黃曲霉毒素B₁

國(guó)內(nèi)外非常重視黃曲霉毒素的防控，為控制黃曲霉毒素污染的危害，國(guó)家法典委員會(huì)（CAC）和美國(guó)食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA）規(guī)定食品中黃曲霉總量不能超過(guò)15μg/kg。

GB 2761-2017 《食品中真菌毒素限量》國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的各類物質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)

海貍免疫磁珠助力高通量和快速食品檢測(cè)

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